尖锐湿疣的发病机理

　　尖锐湿疣的HPV感染通过性接触传播，接触部位的小创伤可促进感染，三种鳞状上皮（皮肤、粘膜、化生的）对HPV感染都敏感。每一型HPV与特殊的临床损害有关，且对皮肤或粘膜鳞状上皮各有其好发部位。当含有比较大量病毒颗粒的脱落表层细胞或角蛋白碎片进入易感上皮裂隙中时，感染就可能产生，它可因直接接触或少见的自动接种或经污染的内裤、浴盆、浴巾、便盆感染。病毒感染人体后，可潜伏在基底角朊细胞间，在表皮细胞层复制，HPV侵入细胞核，引起细胞迅速分裂，同时伴随病毒颗粒的繁殖与播散，形成特征性的乳头瘤。晚期基因表达结构多肽，即出现结构蛋白装配颗粒，病毒主要集中在颗粒层中的细胞核内，在表皮的颗粒层出现凹空细胞增多，组织学上正常的上皮细胞也有HPV，治疗后残余的DNA常可导致疾病的复发。

尖锐湿疣的发病机理

　　尖锐湿疣的HPV感染通过性接触传播，接触部位的小创伤可促进感染，三种鳞状上皮（皮肤、粘膜、化生的）对HPV感染都敏感。每一型HPV与特殊的临床损害有关，且对皮肤或粘膜鳞状上皮各有其好发部位。当含有比较大量病毒颗粒的脱落表层细胞或角蛋白碎片进入易感上皮裂隙中时，感染就可能产生，它可因直接接触或少见的自动接种或经污染的内裤、浴盆、浴巾、便盆感染。病毒感染人体后，可潜伏在基底角朊细胞间，在表皮细胞层复制，HPV侵入细胞核，引起细胞迅速分裂，同时伴随病毒颗粒的繁殖与播散，形成特征性的乳头瘤。晚期基因表达结构多肽，即出现结构蛋白装配颗粒，病毒主要集中在颗粒层中的细胞核内，在表皮的颗粒层出现凹空细胞增多，组织学上正常的上皮细胞也有HPV，治疗后残余的DNA常可导致疾病的复发。

尖锐湿疣的诊断与鉴别诊断

　　（一）生殖器鳞状细胞癌
　　
　　多见于40岁以上的人，无不洁性交史，损害浸润明显，质坚硬、易出血，常形成溃疡，组织病理检查可以确诊。
　　
　　（二）扁平湿疣
　　
　　属二期梅毒疹，为发生于生殖器部位的肥厚性斑块，表面扁平而糜烂，可有密集颗粒呈乳头状、菜花状，基底宽阔，暗视野检查可查到梅毒螺旋体，梅毒血清反应强阳性。
　　
　　（三）生殖器鲍温样丘疹病（Bowenoidpapulosisofthegenitalis）
　　
　　为多发性小的红褐色丘疹，直径2～10mm，可融合成斑块。损害位于男性的龟头、阴茎干、女性的肛周和阴唇等部位，多见于40岁以下性活跃的人群。临床上像尖锐湿疣而组织学上类似鲍温病。损害可自行消退。
　　
　　（四）假性湿疣
　　
　　主要发生于女性小阴唇，特别是小阴唇内侧和阴道前庭，呈对称密集分布的直径1～2mm的白色或淡红色小丘疹，表面光滑，宛如鱼子，有些亦呈息肉状。无明显自觉症状，偶有瘙痒。组织病理检查见表皮角质层轻度灶性角化不全、棘层不规则增厚，表皮细胞胞浆丰富，淡染，未见空泡化，真皮浅层毛细血管扩张、充血、周围有稀疏炎症细胞。
　　
　　（五）阴茎珍珠状丘疹（pearlypeni1epapules）
　　
　　为环绕阴茎冠状沟的小珍珠状丘疹，圆锥状、球状或不规则形，直径约1～2mm，沿冠状沟排列成一行或数行，互不融合，无自觉症状。
　　
　　诊断尖锐湿疣的实验室检查
　　
　　典型的尖锐湿疣一般不需作实验室检查即可作出诊断。当患者症状不典型，部位不典型，特别是妇女，其阴道口可有类似于尖锐湿疣的假性湿疣，需作实验室检查以明确诊断。常用的实验室检查有如下的方法：
　　
　　(1)细胞学检查　取阴道、子宫颈等部位的湿疣组织作成涂片，作帕氏染色。在涂片中可以见到两种细胞，一种细胞的核周围有晕环，它占据了细胞浆的大部分，而将细胞浆压缩到边缘呈浓缩状，此种细胞称为空泡化细胞，它来源于浅层的鳞状上皮细胞；另一种细胞称为角化不良细胞，可单个或成堆分布，胞浆呈橙红色至淡黄色，核小而致密。在尖锐湿疣病的的涂片中这两种细胞常可混合存在。
　　
　　(2)组织病理变化　主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生。粒层和棘层上部细胞有明显的空泡形成。棘细胞基底细胞有相当数量之核分裂，颇似癌变，但细胞排裂规则，且增生上皮和真皮之间境界清楚。
　　
　　(3)组织化学检查　取少量病损组织制成涂片，用特异性抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如果病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合，在用过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。
　　
　　对尖锐湿疣的实验室检查，目前还很不成熟，组织学检查和组织病理检查都有一定的误诊率，需在条件好的医院检查。

尖锐湿疣的诊断与鉴别诊断

　　（一）生殖器鳞状细胞癌
　　
　　多见于40岁以上的人，无不洁性交史，损害浸润明显，质坚硬、易出血，常形成溃疡，组织病理检查可以确诊。
　　
　　（二）扁平湿疣
　　
　　属二期梅毒疹，为发生于生殖器部位的肥厚性斑块，表面扁平而糜烂，可有密集颗粒呈乳头状、菜花状，基底宽阔，暗视野检查可查到梅毒螺旋体，梅毒血清反应强阳性。
　　
　　（三）生殖器鲍温样丘疹病（Bowenoidpapulosisofthegenitalis）
　　
　　为多发性小的红褐色丘疹，直径2～10mm，可融合成斑块。损害位于男性的龟头、阴茎干、女性的肛周和阴唇等部位，多见于40岁以下性活跃的人群。临床上像尖锐湿疣而组织学上类似鲍温病。损害可自行消退。
　　
　　（四）假性湿疣
　　
　　主要发生于女性小阴唇，特别是小阴唇内侧和阴道前庭，呈对称密集分布的直径1～2mm的白色或淡红色小丘疹，表面光滑，宛如鱼子，有些亦呈息肉状。无明显自觉症状，偶有瘙痒。组织病理检查见表皮角质层轻度灶性角化不全、棘层不规则增厚，表皮细胞胞浆丰富，淡染，未见空泡化，真皮浅层毛细血管扩张、充血、周围有稀疏炎症细胞。
　　
　　（五）阴茎珍珠状丘疹（pearlypeni1epapules）
　　
　　为环绕阴茎冠状沟的小珍珠状丘疹，圆锥状、球状或不规则形，直径约1～2mm，沿冠状沟排列成一行或数行，互不融合，无自觉症状。
　　
　　诊断尖锐湿疣的实验室检查
　　
　　典型的尖锐湿疣一般不需作实验室检查即可作出诊断。当患者症状不典型，部位不典型，特别是妇女，其阴道口可有类似于尖锐湿疣的假性湿疣，需作实验室检查以明确诊断。常用的实验室检查有如下的方法：
　　
　　(1)细胞学检查　取阴道、子宫颈等部位的湿疣组织作成涂片，作帕氏染色。在涂片中可以见到两种细胞，一种细胞的核周围有晕环，它占据了细胞浆的大部分，而将细胞浆压缩到边缘呈浓缩状，此种细胞称为空泡化细胞，它来源于浅层的鳞状上皮细胞；另一种细胞称为角化不良细胞，可单个或成堆分布，胞浆呈橙红色至淡黄色，核小而致密。在尖锐湿疣病的的涂片中这两种细胞常可混合存在。
　　
　　(2)组织病理变化　主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生。粒层和棘层上部细胞有明显的空泡形成。棘细胞基底细胞有相当数量之核分裂，颇似癌变，但细胞排裂规则，且增生上皮和真皮之间境界清楚。
　　
　　(3)组织化学检查　取少量病损组织制成涂片，用特异性抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如果病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合，在用过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。
　　
　　对尖锐湿疣的实验室检查，目前还很不成熟，组织学检查和组织病理检查都有一定的误诊率，需在条件好的医院检查。

尖锐湿疣常用的五种诊断方法

　　一、醋酸白试验
　　
　　用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见。
　　
　　二、免疫组织学检查
　　
　　常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法（即PAP），显示湿疣内的病毒蛋白，以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。
　　
　　三、组织化学检查
　　
　　取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。
　　
　　四、病理检查
　　
　　主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡、中央有大而圆，深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混，故须多次活检。若有缓慢发展之倾向，则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状癌。
　　
　　五、基因诊断
　　
　　迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。
　　
　　（一）标本的采集及处理
　　
　　1．标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心（3000g，10min）洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA。
　　
　　2．标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液（10mmol/LTris-HCl，pH7.4，10mmol/LEDTA，150mmol/LNaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K）37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1)，氯仿/异戊醇（24:1）各抽提2次；加1/10体积3mol/LNaAc（pH5.2）及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀DNA；加1体积乙醇洗涤1次；用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/LTris-HCl，pH8.0，1.0mmol/LEDTA)溶解DNA，37℃温育30min。
　　
　　（二）PCR扩增
　　
　　1．nbsp;引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区（E）和晚期区（L），每区含一系列开放读码框架（ORF）。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV。
　　
　　2．PCR反应试剂：TaqDNA聚合酶（2U/ml）、10mmol/LdNTP贮备液（dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L），10×PCR缓冲液(500mmolKCl、40mmol/LMgCl2、100mmol/LTris-HCl、pH8.5)，100μmol/LMY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
　　
　　3．PCR扩增方法和程序：以100μlPCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
　　
　　（1）实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。每支反应管中含有的PCR反应试剂
　　
　　（2）各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
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尖锐湿疣常用的五种诊断方法

　　一、醋酸白试验
　　
　　用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见。
　　
　　二、免疫组织学检查
　　
　　常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法（即PAP），显示湿疣内的病毒蛋白，以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。
　　
　　三、组织化学检查
　　
　　取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。
　　
　　四、病理检查
　　
　　主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似癌变。但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡、中央有大而圆，深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混，故须多次活检。若有缓慢发展之倾向，则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状癌。
　　
　　五、基因诊断
　　
　　迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。
　　
　　（一）标本的采集及处理
　　
　　1．标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心（3000g，10min）洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA。
　　
　　2．标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液（10mmol/LTris-HCl，pH7.4，10mmol/LEDTA，150mmol/LNaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K）37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿(1:1)，氯仿/异戊醇（24:1）各抽提2次；加1/10体积3mol/LNaAc（pH5.2）及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀DNA；加1体积乙醇洗涤1次；用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/LTris-HCl，pH8.0，1.0mmol/LEDTA)溶解DNA，37℃温育30min。
　　
　　（二）PCR扩增
　　
　　1．nbsp;引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区（E）和晚期区（L），每区含一系列开放读码框架（ORF）。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV。
　　
　　2．PCR反应试剂：TaqDNA聚合酶（2U/ml）、10mmol/LdNTP贮备液（dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L），10×PCR缓冲液(500mmolKCl、40mmol/LMgCl2、100mmol/LTris-HCl、pH8.5)，100μmol/LMY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
　　
　　3．PCR扩增方法和程序：以100μlPCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
　　
　　（1）实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。每支反应管中含有的PCR反应试剂
　　
　　（2）各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
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